パーキンソン病

ドーパミン。the loss of DA neurons ドパミン神経細胞の喪失

ドパミンの前駆物質（L-DOPA）にフッ素（^18F など）を付けたもの。PET 検査で使用されます

炎症を可視化するための放射性トレーサー（^18F標識）。PET 検査で使用されます

3人の患者

4人の患者

ドパミン合成。脳内でドパミンが作られる過程・能力

ドパミン神経前駆細胞。まだ未成熟な細胞。分裂・増殖できる

パーキンソン病の重症度（進行度）を評価する指標

幹細胞やiPS細胞から作製された、臓器の構造や機能を部分的に再現した三次元組織

網膜、神経節細胞、内層細胞、視細胞、網膜色素上皮細胞（RPE細胞）

網膜変性、シナプス形成：神経細胞同士が情報伝達を行うための接続部（シナプス）を形成

解剖、不要組織

OCT（Optical Coherence Tomography：光干渉断層計）で撮影した、網膜などの断面画像

網膜の神経線維が集まり、視神経として眼球の外へ出ていく部分。視神経の出口、網膜中心動脈・静脈の出入口、光受容体（視細胞）が存在しないため盲点（もうてん）に相当する

網膜の中心部にある、最も視力が高い領域。黄斑（おうはん）の中央に位置する

光受容体細胞が本来とは異なる向きで円形（ロゼット状）に配列した構造。光受容体が正常な層構造を形成できず、光受容体細胞が円形に集まる

移植眼、健眼（反対側の眼）

全視野刺激閾値検査。どのくらい弱い光を感じ取れるかを測定する検査。-20 dB より -40 dB の方が、より弱い光を感知できる

角膜上皮幹細胞疲弊症

非無作為化（ランダムに割付ていない）、非盲検（患者も医師も、どの治療を受けているかを知っている）、単群試験（治療群のみ、対照群なし）、患者全員にiPS細胞由来角膜上皮シートを移植

HLA不一致の状態で角膜上皮シートを移植する手術。角膜は、血管が少ない、リンパ管が少ないため、他の臓器よりも拒絶反応が起きにくい

iPS細胞から、角膜上皮、結膜、水晶体、網膜などの眼の組織を作製するための培養法。細胞が自ら、角膜、結膜、網膜、水晶体に似た領域を形成する

体への負担が少ない治療

ミオシン（筋肉を動かすタンパク質）の働きを抑える薬。心臓の過剰な収縮を抑え、負担を軽減する

悪化した状態を治療により正常に近づける

トランスフォーミング増殖因子β群、サイトカイン（シグナル分子）の一群

細胞が分泌し、近くの細胞に作用する分泌因子

心機能

心壁応力

心臓組織の弾性

心筋梗塞

手術の影響のみを再現した対照群（治療なし・正常心機能）

心筋梗塞を再現した対照群（治療なし）

ラテン語で「ガラスの中で」。生体外実験。培養環境下。⇔ in vivo 生体内実験

ヒトiPS細胞から動物由来成分を用いずに誘導した間葉系間質細胞

骨、軟骨、脂肪などへ分化する能力に加えて、炎症を抑えたり免疫を調節したりする作用を示す

誘導神経堤細胞。発生初期に現れる特殊な細胞で、軟骨、骨、末梢神経など、さまざまな細胞へ分化できる

細胞を培養するための液体・栄養環境

細胞を培養皿に付着しやすくするための表面処理

基準日の4日前 ～ 開始日・基準日。コロニー形成期間

開始日・基準日 ～ 開始から10日後。NCC（神経堤細胞）誘導期間

神経堤細胞候補。NCC らしい特徴を持つ細胞。LR は発現量が高いか低いかの意味（＝ソーティング（選別））

NCCマーカー、神経堤・末梢神経系、NCC形成、NCC移動性、神経堤初期、神経系分化、未分化iPS細胞
本当に NCC へ分化できたか、を示す

末梢神経系ニューロンのマーカー
神経細胞マーカー。神経へ分化していることを示す。Peripherin と組み合わせることで、NCC 由来の末梢神経へ分化した可能性を示唆する
グリア細胞（特にアストロサイト）のマーカー。支持細胞系への分化を示す
メラノサイト（色素細胞）系のマーカー。NCC からメラノサイトへ分化したことを示唆する
→ 誘導した NCC が、複数の細胞系統へ分化可能であることを示している

多能性幹細胞、神経外胚葉、神経板境界、神経堤細胞、外胚葉遺伝子、中胚葉、内胚葉遺伝子、前脳、中脳、中脳後脳境界、後脳、脊髄遺伝子

臨床向け品質。動物由来成分を含まない安全性重視の培養条件

増えた細胞を別の培養皿へ移し替えて増殖を続ける操作。PN0、PN2（凍結保存）、PN4、PN7、PN10

細胞接着や移動に関与する分子。MSCでよく発現する
酵素（ecto-5'-nucleotidase）。代表的MSCマーカー
Thy-1。MSCや線維芽細胞系で高発現
Endoglin。TGF-β関連受容体。MSCマーカーとして重要
Integrin β1。細胞接着関連分子。MSCで高発現
造血幹細胞・血管系マーカー。MSCでは通常陰性
白血球マーカー。血液細胞混入確認用
MHC class II分子。免疫活性化関連。MSCでは通常、陰性または低発現
→ MSC の国際標準的確認方法

抗体が本当に目的の細胞だけに反応しているか確認するための「陰性対照」

PN2 凍結保存 → PN4 まで NCC 増殖 → MC（MSC 誘導開始） → MSC 培地へ変更 → PN0〜PN4 で iMSC 培養

「通常培養」と「骨分化誘導」を比較。GM培養: 通常の MSC 増殖用培地。OIM培養: iMSC を骨細胞方向へ分化させる
「iMSC が本当に骨へ分化できる」ことを示す

XF-iMSC 移植によって、筋肉再生に必要な筋形成関連遺伝子の働きが早期に再開した

PM: 増殖培地、DM: 分化培地、cDM: XF-iMSC 条件付き分化培地

筋肉形成の初期に働く転写因子。「筋肉を作り始めるスイッチ」のような役割
筋肉成熟に関与する転写因子。筋線維形成・成熟で重要
成熟した骨格筋の構成タンパク質。「筋肉そのもの」が形成されている指標
→ 「筋肉がどの段階まで形成されたか」を見る代表的マーカー

細胞が立体的に集まってできた球状の細胞塊

iPS細胞由来神経堤経由MSC（MSC: 間葉系幹細胞）

プロテオグリカン（軟骨基質）を確認
I型コラーゲン。骨、線維組織、瘢痕組織などに多いコラーゲン
II型コラーゲン。良好な軟骨形成を示す
細胞死（アポトーシス）を検出

ブタから採取した天然の関節軟骨
「人工的に作製した軟骨が本物の軟骨にどれくらい近いか」のために比較

スフェロイドを組み合わせて作った立体組織。TUNEL の結果から、construct 化しても大きな細胞死がない

GAGs が増える → 軟骨らしい組織形成を示す

骨髄由来間葉系幹細胞、骨髄MSC、最も研究実績が多い MSC、標準MSCとして扱われる

特定の治療製品や細胞が体内でどのように分布し、移動するかを調査する研究

Long Interspersed Nuclear Element-1。ヒトゲノム中に大量に存在する反復配列（レトロトランスポゾン）。ヒト細胞をマウスへ移植した場合に、ヒト細胞が残っているかを調べる。FAM：蛍光色素
Endogenous Control（内在性コントロール）。DNA抽出やPCRが正常に行われたかを確認するための対照。VIC：EC検出用蛍光色素

ドロップレットデジタルPCR。DNAやRNAを数万個の微小液滴（ドロップレット）に分けてPCRを行い、目的配列の絶対数を測定する方法。ddPCR を使用ヒト細胞が残っているかを調べる方法を LINE1-ddPCR と呼ぶ

測定法、検査法、分析法という意味。～法

試料に溶媒を加えて濃度を下げる。ddPCR や qPCR では、濃度が高すぎると測定誤差が起こる。サンプルを希釈しても測定法が正しく動いていることを確認した

ヒト特異的な Alu 配列を qPCR（定量PCR）で測定する方法

DNA抽出や測定が正しく行われたか確認するために、あらかじめサンプルへ加えておく目印。ヒトLINE1配列やマウスDNAと混同されないため、内部標準として利用できる。プラスミド：人工DNA

細胞や組織を肝臓内へ移植する方法。膵島移植では、通常、門脈（もんみゃく）を介して肝臓内へ移植する
皮膚の下の組織（皮下組織）へ細胞や組織を移植する方法。低侵襲で、移植後に細胞やデバイスを回収しやすいことから、iPS細胞由来膵島細胞の新しい移植法として研究が進められている。膵島細胞は血糖値を感知してインスリンを分泌するため、十分な血流と酸素が供給されれば、肝臓内でなくても、皮下や腹腔内などでも機能する。皮下組織は肝臓に比べて血流や酸素供給が少ないため、移植デバイスの利用、血管新生の促進、移植前の血管床形成などによって、膵島細胞の生着率や機能を向上させる

T細胞とNK細胞の中間的な特徴を持つ、強力な免疫細胞。「異常な細胞」を見つける能力と、「免疫全体を活性化する能力」の両方を持っている。がん細胞を攻撃できる。iNKT細胞：invariant NKT cell 不変型

「臨床試験を適切・透明に報告するための国際的ガイドライン」の図

試験参加条件を満たすか確認した人数、実際に試験へ登録された人数

初回投与、2回目投与

インターロイキンと呼ばれる免疫や炎症に関わる情報伝達物質（サイトカイン）。IL-6：高すぎない方が良い、IL-8：適度な上昇が修復となる

ドナー（提供者）（ここでは他家iPS細胞）の細胞・組織に対して作る抗体

「自家」と「他家」を判別する仕組み

薬物動態。iPS細胞が体内でどのように分布しているか

進行性疾患。病気が進行している状態

がん細胞は、PD-L1という分子を使って免疫細胞の働きを抑える。T細胞やNK細胞が発現するPD-1と、がん細胞のPD-L1が結合することで、これらの細胞の攻撃力が低下し、免疫が抑制される。図は、「T細胞やNK細胞が活性化された結果としてPD-1が増えた」

体内に「ポート（薬剤投与口）」を埋め込み、そこから薬剤を投与する方法。長期投与システム
血管へ安全にカテーテルを入れるための基本手技

免疫チェックポイント阻害薬（Immune Checkpoint Inhibitor）。患者自身の免疫力を回復させてがんを攻撃する。通常、T細胞の PD-1 とがん細胞の PD-L1 が結合すると、T細胞はがん細胞への攻撃を停止する。オプジーボは PD-1 をブロックすることで、T細胞ががん細胞を攻撃し続けられるようにする
Opdivo：T細胞表面の PD-1 を阻害する
Yervoy：T細胞表面の CTLA-4 を阻害する
iPS-NKT細胞の PD-1 を CRISPR-Cas9 で遺伝子操作し、がん細胞の PD-L1 と結合しないようにすることは可能。ただし、PD-1 は免疫の暴走を防ぐ仕組みでもあるため、「抗腫瘍効果の向上」と「安全性」のバランスを取ることが課題。もともと、iPS-NKT細胞は、がん細胞などの CD1d が提示する脂質の目印を認識して活性化し、がん細胞を攻撃する。

CD1d
  ↓
NKT活性化
  ↓
がん攻撃

├─ がん消失
└─ がんが免疫逃避
       ↓
   PD-L1発現
       ↓
   NKT抑制

Good Manufacturing Practice（適正製造規範）。GMP-grade cells（臨床用品質で製造された細胞）。GMPで管理する項目　・製造環境：クリーンルーム、温度、湿度、清潔度　・作業手順：誰が、いつ、どう作業したかを記録　・原材料管理：培地、試薬、細胞　・品質試験：無菌試験、エンドトキシン（細菌由来の毒性物質）、細胞特性、遺伝子異常

HLA：免疫の「自己・非自己」を判定する重要分子。ホモ結合：父由来と母由来のHLAが同じ。頻度の高いHLA型を使用。多くの患者と部分一致しやすい

出産時に、へその緒（臍帯）や胎盤の中に残っている血液。ヒト末梢血： 体内を循環している血液

細胞の遺伝子へ直接組み込まれにくい、安全性の高い遺伝子導入法で使われるDNAベクター。iPS細胞作製では OCT4、SOX2、KLF4、c-MYC などの初期化因子を細胞へ導入する。レトロウイルス法では染色体へ組み込まれるため、遺伝子異常、発がんリスクが問題となる

遺伝子をピンポイントで修正するハサミのような技術。CRISPR：DNAの場所を指定する仕組み、Cas9：DNAを切断する酵素。ガイドRNAが目標を探す→DNAを切る→細胞が修復（この時に遺伝子破壊、遺伝子修正、遺伝子挿入などが可能）。課題：間違った場所を切る可能性、意図しない変異も起こり得る

CRISPR-Cas9 と guide RNA をセンダイウイルスで細胞へ運ぶ。Cas9とgRNAを搭載→細胞へ感染・高効率で細胞へ導入→Cas9とgRNAを発現→DNA切断。・レトロウイルス：染色体挿入、遺伝子破壊、発がんリスク　・センダイ：ゲノム挿入リスク低い

guide RNA がDNA配列を認識。例えば AGCTTAGG... を狙う。guide RNA は相補的配列を認識する。例 DNA: ATCG、guide RNA: UAGC

ドナー（提供者）の識別コード（ID）の1つ。HLA型：A*24:02, B*07:02, DRB1*01:01 を持つ

CIITAを欠損させる→ HLA class II 発現低下→T細胞活性化低下→拒絶反応の低減が期待される

ヒト胎児皮膚由来線維芽細胞（human foreskin fibroblast）。培養しやすい、正常細胞、安定なため、iPS細胞研究でよく使われる。（京都大学iPS細胞研究財団のiPS細胞作製では未使用。）

普通に採血する血液の、核が1つの白血球。京都大学iPS細胞研究財団のセンダイウイルスiPS細胞ストックの作製では、ヒト末梢血由来の細胞が使われている

Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline。ダルベッコPBS。PBS：リン酸緩衝生理食塩水。細胞を洗浄、希釈、一時保持するために使う。普通の水では細胞が壊れる可能性がある。細胞を傷めずに扱うための、生体に近い塩類溶液

液体の中に細胞を分散させた状態。細胞凝集、沈殿、細胞死していないこと

細胞を未分化状態で維持する

準備

細胞や試料を一定の温度・湿度・ガス濃度の条件下で保持し、培養や反応を進めること

6個の培養ウェル（小さな培養皿）が付いた細胞培養用プレート。各ウェルで別々に細胞を培養できる。StemFit マニュアルでは、6-well（培養面積：9.6 cm²、培地量：1.5 mL、iMatrix-511：5 µL）となっている

細胞を培養容器（プレートやフラスコ）に入れて培養を開始すること

Room Temperature（室温）